一、適用范圍
 

　　本規范適用于科研實驗室、醫學檢驗實驗室各類生物樣本(血液、組織、細胞、體液、微生物等)的DNA 定量檢測全流程操作、質量控制、儀器使用及結果管理，統一實驗室操作標準，保障檢測數據精準、可靠、可溯源。
 

　　二、檢測原理
 

　　利用紫外分光光度法、熒光染料法、實時熒光定量 PCR 等主流原理，通過檢測核酸吸光度或熒光信號強度，精準測定樣本中 DNA 濃度、純度，為分子克隆、PCR 擴增、基因測序、文庫構建等下游實驗提供合格核酸模板。
 

　　三、儀器與試劑要求
 

　　核心儀器：超微量核酸分光光度計、熒光定量檢測儀、高速冷凍離心機、超凈工作臺、恒溫水浴鍋、移液器等，定期校準、期間核查，建立設備使用臺賬。
 

　　試劑耗材：專用 DNA 提取試劑盒、熒光定量試劑、無菌離心管、無酶槍頭，試劑在有效期內保存，耗材一次性使用，杜絕核酸污染。
 

　　環境要求：實驗室分區管理(試劑配制區、樣本處理區、檢測分析區)，分區專用器具，定期紫外消毒、清潔除塵，控制溫濕度。
 

　　四、樣本處理規范
 

　　樣本采集后及時標記編號、錄入信息，低溫保存，避免反復凍融降解 DNA。
 

　　嚴格按照試劑盒說明書進行裂解、萃取、洗脫操作，操作全程佩戴手套、口罩，避免人為核酸污染。
 

　　渾濁、溶血、降解嚴重樣本需重新處理或棄用，不進入定量檢測流程。
 

　　五、DNA 定量檢測操作流程
 

　　儀器開機預熱，進行空白校準、基線校正，確保儀器狀態正常。
 

　　取標準空白液調零，依次加入待測 DNA 樣本，平行設置 2–3 個重復樣。
 

　　上機檢測，讀取 DNA 濃度、OD260/280、OD260/230 比值，記錄原始數據。
 

　　熒光法檢測需配制標準曲線，梯度稀釋標準品，保證曲線線性符合實驗要求。
 

　　六、質量控制標準
 

　　純度標準：DNA 合格 OD260/280 控制在 1.8–2.0 之間，偏離范圍提示有蛋白、多糖或 RNA 污染。
 

　　平行樣濃度偏差≤5%，超出偏差需重新檢測。
 

　　每次檢測設置陰性對照、陽性對照，排查污染與試劑失效問題。
 

　　七、結果判定與數據管理
 

　　根據濃度與純度數據，判定樣本是否滿足后續實驗使用要求，不合格樣本重新提取定量。
 

　　原始檢測數據、圖譜、實驗記錄及時存檔，編號可溯源，嚴禁隨意篡改數據。
 

　　出具檢測記錄時標注樣本信息、檢測方法、儀器型號、檢測日期及操作人員。
 

　　八、安全與注意事項
 

　　實驗廢棄物分類處理，生物樣本、廢試劑按實驗室危廢規范集中處置。
 

　　移液器、離心管避免交叉混用，勤換耗材，防止樣本間交叉污染。
 

　　定期維護校準檢測儀器，做好維護記錄，異常設備停用檢修后方可使用。